Plasmide CRISPR d'Activation (h) Centrin-1: sc-404287-ACT

Le gène humain **CETN1** code la centrine‑1, une protéine conservée de liaison au calcium de type EF‑hand, associée aux centrosomes et aux corps basaux, qui soutient la biogenèse des centrioles, la duplication du centrosome et l’organisation des microtubules. Par ses interactions avec les échafaudages centrosomaux et via des changements conformationnels dépendants du calcium, la centrine‑1 contribue à la progression du cycle cellulaire et à la fidélité de l’assemblage du fuseau mitotique. Un dérèglement du nombre de centrioles et de la fonction du centrosome est lié à l’instabilité chromosomique et à une ciliogenèse altérée, ce qui rend **CETN1** pertinent pour les études sur le maintien du génome et la signalisation proliférative. **CETN1** est également fréquemment étudié dans le contexte de programmes d’expression restreints à certains tissus et de profils d’expression aberrants observés en biologie du cancer et en régulation du développement.

Centrin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CETN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Centrin-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CETN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CETN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Centrin-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CETN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Centrin-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Centrin-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de CETN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.