Plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-F (h): sc-402178

Présentation

CENPF code pour CENP-F, une grande protéine associée au kinétochore qui s’accumule en fin de phase G2 et pendant la mitose, et coordonne l’alignement des chromosomes, la signalisation du point de contrôle du fuseau (spindle checkpoint) et la ségrégation fidèle au cours de la division cellulaire. CENP-F contribue à l’attachement des microtubules aux kinétochores et soutient la fonction du centrosome ainsi que la dynamique du fuseau, ce qui la relie aux voies clés de progression mitotique et de stabilité du génome. Une dérégulation de l’expression ou de la localisation de CENPF est associée à une instabilité chromosomique et à une capacité proliférative altérée, des caractéristiques fréquemment étudiées en biologie du cancer. CENP-F sert également de marqueur de l’état du cycle cellulaire et fait l’objet d’études portant sur ses rôles dans l’architecture nucléaire et les réponses au stress mitotique dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CENP-F (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CENPF dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CENPF, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CENPF à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CENP-F.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CENPF pour l'étude de la signalisation de CENP-F, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CENPF essentiels à la fonction de CENP-F
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CENPF pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CENP-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CENP-F plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CENPF. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CENP-F plasmide HDR (h) et le CENP-F (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CENPF pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CENPF définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.