Plasmide Double Nickase (h) CENP-C: sc-403000-NIC

CENPC code pour la protéine centromérique C (CENP‑C), un composant central du kinétochore interne qui se lie à la chromatine centromérique et contribue à organiser le réseau constitutif associé au centromère, indispensable à un attachement stable des microtubules. CENP‑C coordonne l’assemblage du kinétochore et la signalisation du point de contrôle du fuseau afin d’assurer une congrégation et une ségrégation fidèles des chromosomes pendant la mitose, reliant l’identité du centromère à la progression du cycle cellulaire. La perturbation de l’architecture du kinétochore dépendante de CENP‑C favorise la mauvaise ségrégation des chromosomes et l’aneuploïdie, des processus fréquemment associés à l’instabilité du génome dans les troubles prolifératifs. En conséquence, CENP‑C est largement étudiée en biologie du centromère, en fidélité mitotique et dans les mécanismes qui couplent l’organisation de la chromatine à l’hérédité chromosomique.

CENP-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CENPC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CENPC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CENPC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CENPC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.