CENP-C CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403000-ACT

CENPC kodiert das Zentromerprotein C (CENP‑C), eine essenzielle Komponente des inneren Kinetochors, die an zentromerisches Chromatin bindet und die Organisation des konstitutiven, zentromerassoziierten Netzwerks unterstützt, das für eine korrekte Chromosomentrennung erforderlich ist. CENP‑C trägt während der Mitose zur Kinetochorassemblierung und zur Anheftung von Mikrotubuli bei, unterstützt die Signalgebung des Spindelkontrollpunkts (Spindle Checkpoint) sowie die zuverlässige Kohäsion und Trennung der Schwesterchromatiden. Störungen oder Fehlregulationen von Zentromer- und Kinetochorproteinen, einschließlich CENP‑C, werden mit chromosomaler Instabilität und Aneuploidie in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig in der Krebsbiologie und der Genomstabilitätsforschung untersucht werden. Als zentraler Zentromerfaktor wird CENP‑C breit als Marker und als mechanistischer Einstiegspunkt genutzt, um Mitoseprogression, Zentromeridentität und die epigenetische Regulation der Chromosomenvererbung zu untersuchen.

CENP-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CENPC-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CENP-C Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CENPC-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CENPC-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CENP-C-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CENPC-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CENP-C-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CENP-C-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CENPC-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.