Plasmide Double Nickase (h) CENP-B: sc-401356-NIC

Le gène humain **CENPB** code la protéine du centromère B (CENP-B), un facteur de liaison à l’ADN spécifique de séquence qui reconnaît les motifs « boîte CENP-B » au sein des répétitions alpha-satellite et contribue ainsi à l’organisation de la chromatine centromérique. CENP-B participe à l’assemblage du kinétochore et à la ségrégation fidèle des chromosomes pendant la mitose, soutenant la stabilité du génome grâce à un attachement correct au fuseau mitotique et au bon fonctionnement du centromère. La perturbation de l’intégrité du centromère et de la signalisation du kinétochore est associée à l’aneuploïdie et à l’instabilité chromosomique, des processus fréquemment étudiés en biologie du cancer et dans les troubles du développement. CENP-B est également un autoantigène bien connu dans les maladies auto-immunes positives aux anticorps anti-centromère, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la présentation des antigènes nucléaires et de la reconnaissance immunitaire.

CENP-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CENPB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CENPB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CENPB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CENPB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.