Plasmide Double Nickase (h) CENP-A: sc-402359-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CENP-A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CENP-A Double Nickase (h) et le plasmide CENP-A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CENPA. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CENP-A | sc-402359-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CENP-A | sc-402359-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CENPA code CENP-A, une variante de l’histone H3 qui remplace l’H3 canonique au sein des nucléosomes centromériques afin d’établir et de maintenir l’identité du centromère. En recrutant les composants du réseau constitutif associé au centromère et en permettant l’assemblage du kinétochore, CENP-A assure une ségrégation correcte des chromosomes, la signalisation du point de contrôle du fuseau et la stabilité du génome au cours de la mitose. Son dépôt est coordonné avec le remodelage de la chromatine et des voies de maintenance du centromère régulées par le cycle cellulaire, reliant l’architecture de la chromatine centromérique au contrôle de la prolifération. Une expression dérégulée de CENP-A ou sa mauvaise localisation est associée à l’instabilité chromosomique et à des phénotypes d’aneuploïdie observés dans de nombreux contextes cancéreux ainsi que dans d’autres troubles de maintenance du génome.
CENP-A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CENPA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CENPA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CENPA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CENPA.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.