Plasmide CRISPR/Cas9 KO CEACAM7 (h): sc-406726

Présentation

CEACAM7 (carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 7) est un membre de la superfamille des immunoglobulines ancré à la membrane par un GPI, impliqué dans l’adhérence cellule–cellule homophile et hétérophile au niveau des surfaces épithéliales. Par le biais d’interactions qui influencent l’organisation membranaire et la signalisation dépendante du contact, CEACAM7 contribue à la différenciation épithéliale, à la polarité et aux processus associés à la fonction barrière au sein des tissus muqueux. Une expression altérée de CEACAM7 a été associée au remodelage épithélial et à des modifications liées aux tumeurs touchant les programmes d’adhérence et de différenciation, ce qui en fait un nœud moléculaire utile pour étudier les mécanismes reliant l’adhérence cellulaire au contrôle de la croissance. En biologie du cancer et dans la recherche sur les épithéliums muqueux, CEACAM7 est souvent étudiée aux côtés d’autres membres de la famille CEACAM afin de comprendre la compensation des voies et les phénotypes induits par l’adhérence.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CEACAM7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CEACAM7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CEACAM7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CEACAM7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CEACAM7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CEACAM7 pour l'étude de la signalisation de CEACAM7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CEACAM7 essentiels à la fonction de CEACAM7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CEACAM7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CEACAM7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CEACAM7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CEACAM7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CEACAM7 plasmide HDR (h) et le CEACAM7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CEACAM7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CEACAM7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.