Plasmide CRISPR d'Activation (h) CEACAM5: sc-401219-ACT

CEACAM5 (molécule d’adhésion cellulaire 5 apparentée à l’antigène carcinoembryonnaire) est une protéine de la superfamille des immunoglobulines, ancrée à la membrane par un glycosylphosphatidylinositol (GPI), exprimée à la surface apicale des cellules épithéliales, où elle contribue à l’adhésion cellule–cellule et au maintien de l’architecture tissulaire. Par des interactions homophiliques et hétérophiliques, CEACAM5 peut influencer la différenciation et la polarité épithéliales, ainsi que la signalisation dépendante du contact, en interface avec des voies dépendantes de l’adhésion et avec le remodelage du glycocalyx de surface. Une expression dérégulée de CEACAM5 est fréquemment associée aux cancers d’origine épithéliale et est largement utilisée comme marqueur moléculaire dans les études de biologie des cellules tumorales, notamment l’invasion, les métastases et les interactions immunitaires au sein du microenvironnement tumoral. Sa localisation membranaire et la variabilité de son expression selon les contextes en font un point d’entrée utile pour explorer les changements d’état épithélial et les programmes de signalisation oncogénique.

CEACAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CEACAM5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CEACAM5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CEACAM5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CEACAM5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CEACAM5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CEACAM5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CEACAM5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CEACAM5 dans les cellules tumorales présentant une expression de CEACAM5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.