Plasmide CRISPR d'Activation (h) CDYL: sc-406624-ACT

Le CDYL humain (chromodomain Y-like) est un corégulateur associé à la chromatine qui se lie aux lysines méthylées des histones et contribue au contrôle épigénétique de la transcription. Grâce à son chromodomaine et à une activité de type hydratase du crotonyl‑CoA, CDYL peut moduler les états de crotonylation et d’acétylation des histones, favorisant la formation d’hétérochromatine, la répression transcriptionnelle et des programmes géniques du développement. CDYL participe à des voies impliquées dans la différenciation neuronale, le développement des cellules germinales et le remodelage de la chromatine lié aux dommages de l’ADN, ce qui reflète son rôle dans le maintien d’états régulateurs du génome. Une expression ou une fonction dérégulée de CDYL a été associée à des réseaux transcriptionnels altérés décrits dans des phénotypes neurodéveloppementaux et dans la reprogrammation épigénétique liée au cancer, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation génique dépendante de la chromatine.

CDYL Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDYL sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CDYL Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDYL dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDYL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CDYL. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDYL natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CDYL au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CDYL dans les cellules tumorales présentant une expression de CDYL silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.