Particules Lentivirales d'Activation (h) CDw75/ST6GAL1: sc-402881-LAC

ST6GAL1 code la bêta-galactoside alpha-2,6-sialyltransférase 1 (CDw75), une enzyme résidente de l’appareil de Golgi qui catalyse l’ajout d’acide sialique lié en α2,6 sur les résidus galactose terminaux des N-glycanes des glycoprotéines et des glycolipides. En façonnant les profils de glycosylation à la surface cellulaire, ST6GAL1 influence la stabilité des protéines, le regroupement des récepteurs et la reconnaissance des ligands, s’intégrant à des processus tels que la signalisation des cellules immunitaires, l’adhésion et le trafic cellulaire. Une activité modifiée de ST6GAL1 est fréquemment étudiée dans le contexte du remodelage des glycannes associé au cancer, de l’échappement immunitaire et de phénotypes liés aux métastases, ainsi que de la signalisation inflammatoire et de la différenciation des cellules hématopoïétiques. Son rôle dans la modulation de voies dépendantes de la sialylation en fait un nœud clé pour étudier les mécanismes glyco-régulateurs dans une grande diversité de types cellulaires.

Les particules d'activation lentivirales CDw75/ST6GAL1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ST6GAL1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CDw75/ST6GAL1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ST6GAL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CDw75/ST6GAL1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ST6GAL1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.