Plasmide CRISPR d'Activation (h) CDw75/ST6GAL1: sc-402881-ACT

ST6GAL1 (CDw75) code une sialyltransférase β-galactoside α2,6 résidente de l’appareil de Golgi, qui ajoute de l’acide sialique en liaison α2,6 sur les N‑glycanes, façonnant ainsi la composition des glycoprotéines de surface cellulaire et la fonction des récepteurs. En modulant les interactions dépendantes des glycanes, ST6GAL1 influence le trafic des protéines, la reconnaissance immunitaire et les réponses de signalisation liées aux voies d’adhésion et de survie. Une activité altérée de ST6GAL1 et des profils de sialylation α2,6 ont été associés à une différenciation dérégulée, à une signalisation inflammatoire et à des phénotypes de glycosylation liés aux tumeurs. Dans des systèmes modèles humains, ST6GAL1 est largement étudiée pour son impact sur la liaison des lectines, les épitopes CDw75 associés aux lymphocytes B et la régulation des récepteurs dépendante de la glycosylation.

CDw75/ST6GAL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ST6GAL1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CDw75/ST6GAL1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ST6GAL1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ST6GAL1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CDw75/ST6GAL1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ST6GAL1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CDw75/ST6GAL1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CDw75/ST6GAL1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ST6GAL1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.