Plasmide Double Nickase (h) CDKN2C/p18 INK4c: sc-401214-NIC

CDKN2C code pour p18^INK4c, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui se lie à CDK4/6 afin de freiner l’activité kinase dépendante de la cycline D et d’imposer le point de contrôle G1/S du cycle cellulaire. En limitant la phosphorylation de RB1 et les programmes transcriptionnels E2F en aval, CDKN2C contribue au contrôle de la prolifération, à la différenciation cellulaire et aux réponses associées à la sénescence. Une altération de la fonction ou de l’expression de CDKN2C a été associée à une progression dérégulée du cycle cellulaire observée dans de nombreux contextes cancéreux et hémopathies malignes, et le gène est fréquemment étudié aux côtés d’autres régulateurs de la famille INK4. CDKN2C est également pertinent pour les voies qui intègrent les signaux mitogènes au contrôle des points de contrôle, notamment la régulation des axes RB/E2F et CDK4/6.

CDKN2C/p18 INK4c Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN2C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN2C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN2C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN2C.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.