Plasmide Double Nickase (h) CDKN2B/p15 INK4B: sc-400570-NIC

CDKN2B code p15^INK4B, un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines qui se lie à CDK4/6 afin de limiter la phosphorylation de RB et d'imposer le point de contrôle G1/S. En tant que nœud central du contrôle du cycle cellulaire, CDKN2B intègre des signaux provenant de voies antiprolifératives telles que TGF-β/SMAD ainsi que de programmes plus larges de sénescence qui restreignent une prolifération inappropriée. Une régulation altérée de CDKN2B - incluant la délétion, la méthylation du promoteur ou la perturbation du locus en 9p21 - est fréquemment associée à une perte du contrôle de la croissance dans divers cancers et à des phénotypes liés à une prolifération aberrante. Cette biologie fait de CDKN2B une cible utile pour étudier l'application des points de contrôle, l'échappement à la sénescence et les interactions entre voies convergeant vers la signalisation CDK4/6–RB.

CDKN2B/p15 INK4B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDKN2B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDKN2B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDKN2B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDKN2B.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.