Plasmide Double Nickase (m) CDKN1B/Kip1 p27: sc-419608-NIC

Cdkn1b code l’inhibiteur de kinases dépendantes des cyclines p27^Kip1 (CDKN1B), un régulateur négatif majeur de la progression du cycle cellulaire qui freine l’activité CDK2–cycline E/A et contribue au maintien du point de contrôle G1/S. p27 intègre les signaux mitogènes au contrôle de la croissance via des voies incluant la signalisation PI3K–AKT, où une localisation subcellulaire dépendante de la phosphorylation et un renouvellement par le protéasome modulent sa fonction inhibitrice. Dans les systèmes murins, les modifications de la dose ou de la régulation de Cdkn1b sont largement utilisées pour étudier l’équilibre prolifération–différenciation, l’homéostasie tissulaire et les programmes de sénescence cellulaire. Une expression ou une stabilité dérégulées de p27 sont fréquemment associées à un contrôle anormal du cycle cellulaire dans des modèles de biologie du cancer, ainsi qu’à des phénotypes d’hyperprolifération dans des contextes développementaux et régénératifs.

CDKN1B/Kip1 p27 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cdkn1b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cdkn1b. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cdkn1b. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cdkn1b.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.