Plásmido Doble Nickase (h) CDKL5: sc-403409-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CDKL5 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CDKL5 (h) y el plásmido de doble nickasa CDKL5 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CDKL5. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CDKL5 Anticuerpo (D-12): sc-376314
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CDKL5 | sc-403409-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CDKL5 | sc-403409-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDKL5 codifica la quinasa similar a las quinasas dependientes de ciclina 5, una quinasa de serina/treonina que se expresa en altos niveles en el sistema nervioso y favorece la maduración neuronal, la función sináptica y la señalización dependiente de la actividad. CDKL5 regula procesos dependientes de la fosforilación que influyen en la dinámica de la cromatina, los programas de expresión génica y la organización del citoesqueleto, lo que la vincula a vías que controlan el crecimiento de neuritas y la plasticidad sináptica. La alteración o la reducción de la función de CDKL5 se asocia con fenotipos neurodeliberativos graves, lo que la convierte en una diana clave para estudios mecanísticos de la señalización por quinasas en neuronas. En modelos celulares, la perturbación de CDKL5 se utiliza para investigar cómo las cascadas de fosforilación alteradas afectan el desarrollo de redes neuronales y la transcripción sensible a estímulos.
CDKL5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDKL5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDKL5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDKL5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDKL5 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.