Plasmide Double Nickase (h) Cdk6: sc-400309-NIC

CDK6 code la cycline‑dépendante kinase 6 (Cdk6), une kinase sérine/thréonine qui s'associe aux cyclines de type D pour phosphoryler les protéines de la famille RB et favoriser la progression de la phase G1 vers la phase S. Au‑delà du contrôle du cycle cellulaire, Cdk6 s'interface avec les signaux mitogènes issus des voies MAPK et PI3K/AKT et contribue à des programmes transcriptionnels qui coordonnent la prolifération et la différenciation dans les lignées hématopoïétiques et d'autres lignages. Une activité CDK6 dérégulée est fréquemment impliquée dans la prolifération oncogénique et l'altération du contrôle des points de contrôle, et elle est étudiée aux côtés de CDK apparentées dans les mécanismes de dépendance aux facteurs de croissance, de sénescence et d'engagement de lignée. En tant que nœud intégrant les signaux prolifératifs à la machinerie du cycle cellulaire, CDK6 est couramment étudié dans des modèles de biologie tumorale et de troubles prolifératifs.

Cdk6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.