Plásmido Doble Nickase (h) Cdk6: sc-400309-NIC

CDK6 codifica la quinasa dependiente de ciclina 6 (Cdk6), una quinasa de serina/treonina que se asocia con ciclinas de tipo D para fosforilar proteínas de la familia RB y promover la progresión de la fase G1 a la fase S. Más allá del control del ciclo celular, Cdk6 se integra con las salidas de señalización mitogénica de las vías MAPK y PI3K/AKT y contribuye a programas transcripcionales que coordinan la proliferación y la diferenciación en linajes hematopoyéticos y otros. La actividad desregulada de CDK6 se implica con frecuencia en la proliferación oncogénica y en el control alterado de los puntos de control, y se estudia junto con CDK relacionadas en los mecanismos de dependencia de factores de crecimiento, senescencia y compromiso de linaje. Como nodo que integra la señalización proliferativa con la maquinaria del ciclo celular, CDK6 se analiza habitualmente en modelos de biología tumoral y trastornos proliferativos.

Cdk6 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CDK6 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CDK6. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CDK6. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CDK6 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.