Cdk6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400309

Übersicht

CDK6 kodiert die Cyclin-abhängige Kinase 6 (Cdk6), eine Serin/Threonin-Kinase, die mit D‑Typ‑Cyclinen zusammenwirkt, um Proteine der RB‑Familie zu phosphorylieren und den Übergang des Zellzyklus von der G1‑ in die S‑Phase zu fördern. Die Cdk6‑Aktivität verknüpft mitogenes Signaling mit der Checkpoint‑Kontrolle über die Cyclin‑D–CDK4/6–RB–E2F‑Achse und steht in Wechselwirkung mit Signalwegen, die Proliferation, Differenzierung und Seneszenz steuern. Eine fehlregulierte CDK6‑Expression oder -Signalübertragung ist häufig mit einer aberranten Zellzykluskontrolle bei Krebs assoziiert und wird zudem mit Entscheidungen in hämatopoetischen Linien sowie mit entzündlichen Transkriptionsprogrammen in Verbindung gebracht. Aufgrund seiner zentralen Rolle bei der Koordination des Zelleintritts in den Zellzyklus wird CDK6 auf Signalweg‑Ebene intensiv in der Tumorbiologie, der Regulation von Stamm-/Vorläuferzellen und in Mechanismen der Therapieresistenz untersucht.

Das Cdk6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDK6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDK6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDK6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdk6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDK6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdk6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDK6-Exone abzielen, die für die Cdk6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDK6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdk6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cdk6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDK6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdk6 HDR-Plasmid (h) und Cdk6 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDK6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDK6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.