Particules Lentivirales d'Activation (h) CDK5RAP3: sc-408965-LAC

CDK5RAP3 (également appelée C53) est une protéine cytoplasmique et périnucléaire multifonctionnelle impliquée dans la régulation de la progression du cycle cellulaire, la signalisation d’adaptation au stress et l’homéostasie des protéines. Elle a été associée à la modulation de voies dépendantes de kinases, de processus dépendants de l’ubiquitine et du contrôle qualité lié au réticulum endoplasmique, la reliant aux réponses cellulaires au stress protéotoxique et métabolique. Par ces fonctions, CDK5RAP3 est étudiée dans des contextes où la prolifération, l’apoptose et les programmes adaptatifs de réponse au stress sont remodelés, notamment dans la signalisation oncogénique et les phénotypes associés à l’inflammation. Une expression altérée de CDK5RAP3 a été rapportée dans de multiples types de tumeurs, ce qui motive des recherches mécanistiques sur la manière dont elle influence le contrôle de la croissance et les interactions entre voies de signalisation dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CDK5RAP3 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDK5RAP3 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CDK5RAP3 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDK5RAP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CDK5RAP3. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDK5RAP3 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.