CDK5RAP3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-408965-ACT

CDK5RAP3 (auch bekannt als C53/LZAP) ist ein multifunktionelles menschliches Regulationsprotein, das an der Steuerung der Zellzyklusprogression, von Stressantworten und der Signaltransduktion beteiligt ist. Es wurde mit der Modulation von NF-κB- und p53-assoziierten Programmen in Verbindung gebracht und beeinflusst dadurch transkriptionelle Outputs, die Proliferation, Apoptose und inflammatorische Signalgebung steuern. CDK5RAP3 wirkt zudem in Protein-Homöostasewegen mit, einschließlich Interaktionen mit dem Ubiquitin-Proteasom-System sowie ER-assoziierten Stressmechanismen, die die zelluläre Anpassung an proteotoxische Bedingungen prägen. Eine dysregulierte CDK5RAP3-Expression wurde in mehreren Krebszusammenhängen und anderen Erkrankungen beschrieben, die durch veränderte Wachstums- und Stresssignalgebung gekennzeichnet sind, was seine Eignung als mechanistischer Knotenpunkt in krankheitsrelevanten Signalwegen untermauert.

CDK5RAP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK5RAP3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

CDK5RAP3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK5RAP3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK5RAP3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen CDK5RAP3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK5RAP3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von CDK5RAP3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des CDK5RAP3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK5RAP3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.