Plasmide CRISPR d'Activation (h) CDK5RAP3: sc-408965-ACT

CDK5RAP3 (également connu sous le nom de C53/LZAP) est une protéine régulatrice humaine multifonctionnelle impliquée dans le contrôle de la progression du cycle cellulaire, les réponses au stress et la transduction du signal. Elle a été associée à la modulation des programmes dépendants de NF-κB et de p53, influençant les sorties transcriptionnelles qui gouvernent la prolifération, l’apoptose et la signalisation inflammatoire. CDK5RAP3 participe également aux voies de l’homéostasie protéique, notamment via des interactions avec le système ubiquitine–protéasome et la machinerie de stress associée au réticulum endoplasmique, qui façonnent l’adaptation cellulaire aux conditions protéotoxiques. Une expression dérégulée de CDK5RAP3 a été rapportée dans de multiples contextes cancéreux ainsi que dans d’autres troubles caractérisés par une altération des signaux de croissance et de stress, ce qui soutient son intérêt en tant que nœud mécanistique au sein de voies pertinentes pour la maladie.

CDK5RAP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDK5RAP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CDK5RAP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDK5RAP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDK5RAP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CDK5RAP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDK5RAP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CDK5RAP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CDK5RAP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDK5RAP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.