Plásmido CRISPR de Activación (m) Cdk5: sc-419602-ACT

La quinasa dependiente de ciclina 5 (Cdk5) es una quinasa de serina/treonina dirigida por prolina que, a diferencia de las CDK del ciclo celular, se activa principalmente en células posmitóticas mediante su asociación con p35/p39 y regula el desarrollo y la función neuronales. En el ratón, Cdk5 controla la dinámica del citoesqueleto, la guía axonal, el tráfico de vesículas sinápticas y la señalización dependiente de la actividad al fosforilar sustratos que modulan la estabilidad de los microtúbulos, la endocitosis y las respuestas transcripcionales. Interactúa con vías que gobiernan la señalización del calcio, las cascadas de quinasas y la proteostasis, integrando señales que moldean la morfología neuronal y la plasticidad de las redes. La actividad desregulada de Cdk5 se ha vinculado a mecanismos relevantes para la neurodegeneración, la neuroinflamación y fenotipos neuropsiquiátricos, por lo que es un objetivo frecuente en estudios sobre respuestas neuronales al estrés y disfunción a nivel de circuitos.

Cdk5 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Cdk5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Cdk5 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Cdk5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Cdk5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Cdk5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Cdk5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Cdk5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Cdk5 en células tumorales con expresión de Cdk5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.