Cdk5 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400161-ACT

CDK5 kodiert die cyclinabhängige Kinase 5 (Cdk5), eine prolin‑gerichtete Serin/Threonin‑Kinase, die hauptsächlich durch die nicht‑Cyclin‑Kofaktoren p35 (CDK5R1) und p39 (CDK5R2) aktiviert wird. Cdk5 reguliert die neuronale Entwicklung und Funktion durch die Kontrolle der Zytoskelettdynamik, der Axonführung, des Transports synaptischer Vesikel und der aktivitätsabhängigen Signalübertragung; nachgeschaltet beeinflusst dies Phosphorylierungsnetzwerke, die die Neuroplastizität prägen. Über das Nervensystem hinaus trägt CDK5 über Interaktionen mit Signalwegen wie der MAPK‑Signalgebung, der Fokaladhäsions‑Signalgebung und der Regulation transkriptioneller Programme zu Zellmigration, Adhäsion und Stressantworten bei. Eine fehlregulierte Cdk5‑Aktivität und veränderte Substrat‑Phosphorylierungsmuster werden mit Mechanismen neurodegenerativer und neuropsychiatrischer Erkrankungen in Verbindung gebracht und werden außerdem in Modellen zur Motilität und Invasion von Krebszellen untersucht.

Cdk5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen CDK5-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Cdk5 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des CDK5-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der CDK5-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Cdk5-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native CDK5-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Cdk5-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Cdk5-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem CDK5-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.