Cdk4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400148

Übersicht

CDK4 kodiert die Cyclin-abhängige Kinase 4 (Cdk4), einen zentralen Regulator der G1-Phase, der mit D-Typ-Cyclinen zusammenwirkt, um Proteine der RB-Familie zu phosphorylieren und die für den Eintritt in die S‑Phase erforderliche, E2F-abhängige Transkription zu fördern. Die Aktivität von Cdk4 wird durch mitogene Signale und CDK-Inhibitoren wie CDKN2A/p16 gesteuert und integriert Signale aus den MAPK/ERK- und PI3K–AKT-Signalwegen in die Entscheidung zum Zellzyklus-Eintritt. Eine Fehlregulation der CDK4–Cyclin‑D–RB-Achse ist häufig mit aberranter Proliferation und veränderter Checkpoint-Kontrolle in Tumor- sowie entwicklungsbiologischen Kontexten verbunden. Als Knotenpunkt-Kinase des Zellzyklus wird CDK4 routinemäßig hinsichtlich seiner Rollen in Proliferation, Seneszenz, Linienspezifizierung und Stressantworten untersucht.

Das Cdk4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDK4-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDK4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDK4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Cdk4-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDK4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Cdk4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDK4-Exone abzielen, die für die Cdk4-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDK4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Cdk4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Cdk4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDK4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Cdk4 HDR-Plasmid (h) und Cdk4 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDK4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDK4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.