Plasmide Double Nickase (h) Cdk2: sc-400111-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cdk2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cdk2 Double Nickase (h) et le plasmide Cdk2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDK2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cdk2 Antibody (D-12): sc-6248
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cdk2 | sc-400111-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cdk2 | sc-400111-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDK2 code la kinase 2 dépendante des cyclines (Cdk2), une kinase sérine/thréonine qui s’associe aux cyclines E et A pour coordonner la transition G1/S et la progression de la phase S. Cdk2 intègre les signaux mitogènes au déclenchement des origines de réplication, à la duplication du centrosome et au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire via la phosphorylation de substrats de l’axe RB–E2F et de la machinerie de réplication de l’ADN. Son activité est régulée par des inhibiteurs de CDK tels que p21 et p27 ainsi que par une phosphorylation activatrice, reliant CDK2 aux réponses aux dommages de l’ADN et au stress de réplication. Une dérégulation de la signalisation CDK2 est fréquemment associée à des phénotypes prolifératifs et à des altérations du maintien du génome observées en biologie du cancer et dans des systèmes modèles apparentés.
Cdk2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDK2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDK2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDK2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDK2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.