Plasmide Double Nickase (h) CDD: sc-403915-NIC

Le gène humain **CDA** code la cytidine désaminase (CDD), une enzyme dépendante du zinc qui catalyse la désamination de la cytidine et de la désoxycytidine en uridine et désoxyuridine, respectivement. Cette activité contribue à la voie de récupération des pyrimidines et à l’homéostasie des pools de nucléotides, influençant la fidélité de la réplication de l’ADN et les réponses cellulaires à la disponibilité des nucléosides. L’expression de CDA et son activité enzymatique modulent les niveaux intracellulaires de substrats analogues de la cytidine et participent à des réseaux métaboliques liés au transport et à la phosphorylation des nucléosides. Des altérations de la fonction ou de l’expression de CDA ont été associées à une variabilité du métabolisme des nucléosides dans des contextes oncologiques et hématologiques, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques sur l’adaptation métabolique et le stress génotoxique.

CDD Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.