Particules Lentivirales d'Activation (h) CDCP1: sc-404730-LAC

CDCP1 (protéine 1 contenant un domaine CUB) est une glycoprotéine transmembranaire impliquée dans les interactions cellule–matrice et dans la régulation dynamique de l’adhésion, de la migration et des signaux de survie. Elle agit comme une plateforme d’assemblage pour les kinases de la famille Src et peut relayer des signaux extracellulaires vers des voies en aval, notamment Src/FAK, PI3K–AKT et MAPK, influençant le remodelage du cytosquelette et la résistance à l’anoïkis. CDCP1 est fréquemment associée à des phénotypes invasifs dans les cancers épithéliaux et a été liée à la progression métastatique ainsi qu’à des mécanismes de résistance aux traitements dans de multiples contextes tumoraux. Ces propriétés font de CDCP1 un nœud pertinent pour étudier le dialogue croisé avec les intégrines, la maturation/processing du récepteur dépendant des protéases et la transduction du signal à la membrane plasmique.

Les particules d'activation lentivirales CDCP1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDCP1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CDCP1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDCP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CDCP1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDCP1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.