Plasmide CRISPR/Cas9 KO CDCP1 (m): sc-430933

Présentation

Cdcp1 code CDCP1, une glycoprotéine transmembranaire à passage unique enrichie à la surface cellulaire, où elle agit comme une plateforme d’assemblage et un nœud de signalisation pour des voies sensibles à l’adhésion et au stress. CDCP1 subit une phosphorylation sur tyrosine et recrute les kinases de la famille Src ainsi que la signalisation via la PKC, influençant le remodelage du cytosquelette, la migration cellulaire, la survie et les interactions avec la matrice extracellulaire. Dans les systèmes murins, l’activité de Cdcp1 a été associée au comportement des cellules épithéliales et stromales, à la résistance à l’anoïkis et à une régulation dépendante du contexte de phénotypes invasifs. Une signalisation CDCP1 dérégulée est fréquemment étudiée dans des modèles de progression tumorale, de programmes associés aux métastases et de microenvironnements inflammatoires, ce qui en fait une cible pertinente pour l’exploration mécanistique des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CDCP1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdcp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdcp1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdcp1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CDCP1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdcp1 pour l'étude de la signalisation de CDCP1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cdcp1 essentiels à la fonction de CDCP1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdcp1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CDCP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CDCP1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdcp1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CDCP1 plasmide HDR (m) et le CDCP1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdcp1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdcp1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.