Cdc6 Double Nickase Plasmid (h): sc-400796-NIC

CDC6 kodiert die humane Cdc6-ATPase, einen zentralen Bestandteil des Prä-Replikationskomplexes, der mit ORC und CDT1 zusammenwirkt, um die MCM2–7-Helikase an Replikationsursprüngen zu laden und damit die DNA-Synthese in der G1-Phase zu lizenzieren. Die Aktivität von Cdc6 ist mit der CDK-abhängigen Kontrolle und der Signalübertragung von Replikations-Checkpoints koordiniert, um eine einmalige Genomduplikation pro Zellzyklus sicherzustellen, und verknüpft das Zünden von Replikationsursprüngen mit dem Fortschreiten des Zellzyklus sowie DNA-Schadensantworten. Eine fehlregulierte CDC6-Expression oder -Funktion kann Replikationsstress, genomische Instabilität und einen aberranten Eintritt in die S-Phase fördern – Prozesse, die häufig bei proliferativen Erkrankungen und in der Krebsbiologie untersucht werden. Als Faktor der Replikationslizenzierung ist Cdc6 zudem relevant für Untersuchungen zur Chromatindynamik, zur Auswahl von Replikationsursprüngen und zu Mechanismen, die Re-Replikation unterdrücken.

Cdc6 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDC6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDC6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDC6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDC6-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.