Plasmide Double Nickase (h) Cdc6: sc-400796-NIC

CDC6 code l’ATPase humaine Cdc6, un composant essentiel du complexe de pré-réplication qui coopère avec ORC et CDT1 pour charger l’hélicase MCM2–7 sur les origines de réplication, autorisant ainsi la synthèse d’ADN pendant la phase G1. L’activité de Cdc6 est coordonnée avec le contrôle dépendant des CDK et la signalisation des points de contrôle de la réplication afin de garantir une duplication du génome une seule fois par cycle cellulaire, reliant l’activation des origines de réplication à la progression du cycle cellulaire et aux réponses aux dommages de l’ADN. Une expression ou une fonction dérégulée de CDC6 peut favoriser le stress réplicatif, l’instabilité génomique et une entrée aberrante en phase S, des processus fréquemment étudiés dans les troubles prolifératifs et la biologie du cancer. En tant que facteur de « licensing » de la réplication, Cdc6 est également pertinent pour les études sur la dynamique de la chromatine, la sélection des origines et les mécanismes qui suppriment la re-réplication.

Cdc6 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC6. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC6. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC6.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.