Plasmide CRISPR d'Activation (h) Cdc42EP4: sc-408523-ACT

CDC42EP4 code pour Cdc42EP4, un effecteur des GTPases Cdc42/Rho qui se lie aux septines et aux complexes associés à l’actine afin de coordonner le remodelage du cytosquelette. Il contribue à la formation des fibres de stress, à la dynamique des adhésions focales et aux changements de forme cellulaire qui influencent la migration et l’adhérence via des réseaux de signalisation dépendants des GTPases Rho. En modulant l’organisation actomyosine et les programmes de polarité cellulaire, Cdc42EP4 est pertinent pour l’étude des transitions de type épithélio-mésenchymateuses, des comportements invasifs et des réponses au microenvironnement dans les cellules humaines. Des altérations de l’expression de CDC42EP4 ont été rapportées dans des contextes de motilité dérégulée et de contrôle du cytosquelette, ce qui soutient son exploration en biologie du cancer, dans le remodelage associé à la fibrose et dans des modèles de mouvements cellulaires au cours du développement.

Cdc42EP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CDC42EP4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Cdc42EP4 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CDC42EP4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CDC42EP4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Cdc42EP4. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CDC42EP4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Cdc42EP4 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Cdc42EP4 dans les cellules tumorales présentant une expression de CDC42EP4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.