CDC42 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-418353-NIC

CDC42 codifica uma pequena GTPase da família Rho, expressa de forma ubíqua, que atua como um interruptor molecular no controlo da remodelação do citoesqueleto de actina, da polaridade celular, do tráfego de membranas e da citocinese. Ao alternar entre os estados ligados a GTP e a GDP sob o controlo de GEFs, GAPs e GDIs, a CDC42 coordena a sinalização através de efetores como PAKs, WASP/N-WASP e o complexo de polaridade PAR, regulando a dinâmica de adesão e a migração direcional. Interage com vias que regulam a endocitose, o brotamento de vesículas e a orientação do fuso mitótico, ligando a arquitetura do citoesqueleto à progressão do ciclo celular. A desregulação da sinalização de CDC42 tem sido associada a fenótipos alterados de proliferação e invasão na biologia do cancro, bem como a perturbações do neurodesenvolvimento e a doenças relacionadas com o sistema imunitário, nas quais a polaridade e o tráfego intracelular se encontram comprometidos.

CDC42 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus CDC42 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de CDC42. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função CDC42. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com CDC42 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.