Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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CDC42 Double Nickase Plasmid (h): sc-418353-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das CDC42 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- CDC42 Double-Nickase-Plasmid (h) und CDC42 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CDC42 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Cdc42: sc-8401
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
CDC42 Double Nickase Plasmid (h) | sc-418353-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
CDC42 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418353-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC42 kodiert eine ubiquitär exprimierte kleine GTPase der Rho-Familie, die als molekularer Schalter wirkt und den Umbau des Aktinzytoskeletts, die Zellpolarität, den Membrantransport und die Zytokinese steuert. Durch den Wechsel zwischen GTP- und GDP-gebundenen Zuständen unter Kontrolle von GEFs, GAPs und GDIs koordiniert CDC42 die Signalweiterleitung über Effektoren wie PAKs, WASP/N‑WASP und den PAR-Polaritätskomplex, um Adhäsionsdynamik und gerichtete Migration zu regulieren. Es ist in Signalwege eingebunden, die Endozytose, Vesikelknospung und die Orientierung der mitotischen Spindel steuern, und verknüpft so die Architektur des Zytoskeletts mit der Zellzyklusprogression. Eine fehlregulierte CDC42-Signalgebung wird mit veränderter Proliferation und Invasivität in der Krebsbiologie sowie mit neuroentwicklungsbezogenen und immunologischen Erkrankungen in Verbindung gebracht, bei denen Polarität und Transportprozesse gestört sind.
CDC42 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CDC42-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CDC42 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CDC42-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CDC42-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.