Plasmide Double Nickase (h) Cdc25B: sc-401457-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Cdc25B correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Cdc25B Double Nickase (h) et le plasmide Cdc25B Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CDC25B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Cdc25B Antibody (DCS-162): sc-56266
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Cdc25B | sc-401457-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Cdc25B | sc-401457-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CDC25B code la phosphatase à double spécificité Cdc25B, un activateur majeur des kinases dépendantes des cyclines qui favorise la progression du cycle cellulaire en retirant les phosphates inhibiteurs de CDK1 et CDK2. En coordonnant la transition G2/M et en intégrant les signaux des points de contrôle en aval des voies de signalisation des dommages à l’ADN telles qu’ATM/ATR, Cdc25B contribue à réguler l’entrée en mitose et les réponses au stress de réplication. Son activité est contrôlée par une localisation et une stabilité protéique dépendantes de la phosphorylation, ce qui la relie à la signalisation MAPK et à la dégradation par le protéasome. Une expression ou une activité dérégulée de CDC25B est associée à une prolifération aberrante, à une instabilité chromosomique et à une dérégulation oncogénique du cycle cellulaire, ce qui en fait une cible fréquente des études en biologie tumorale.
Cdc25B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CDC25B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CDC25B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CDC25B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CDC25B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.