Plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc2 p34 (m): sc-419582

Présentation

Cdk1 code la kinase cycline‑dépendante Cdc2 p34, un moteur central de la progression du cycle cellulaire qui contrôle l’entrée en mitose et coordonne les points de contrôle via la phosphorylation de multiples substrats. En complexe avec les cyclines, CDK1 régule la dynamique des centrosomes, la condensation des chromosomes, la rupture de l’enveloppe nucléaire et l’assemblage du fuseau, en intégrant des signaux issus des réponses aux dommages de l’ADN médiées par ATM/ATR et des voies de stress de réplication. Comme l’activité de CDK1 conditionne la stabilité du génome et la capacité proliférative, une régulation altérée de l’axe CDK1–cycline est fréquemment impliquée dans des phénotypes d’hyperprolifération, l’aneuploïdie et le remodelage du cycle cellulaire associé aux tumeurs. Les modèles murins Cdk1 sont donc largement utilisés pour disséquer des mécanismes conservés du contrôle mitotique, de la fidélité des checkpoints et des transitions de la réplication vers la mitose dans des contextes pertinents pour le développement et la maladie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Cdc2 p34 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cdk1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cdk1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cdk1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Cdc2 p34.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cdk1 pour l'étude de la signalisation de Cdc2 p34, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cdk1 essentiels à la fonction de Cdc2 p34
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cdk1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Cdc2 p34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Cdc2 p34 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cdk1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Cdc2 p34 plasmide HDR (m) et le Cdc2 p34 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cdk1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cdk1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.