Plasmide CRISPR d'Activation (h2) CD81: sc-400185-ACT-2

Le gène humain CD81 code une protéine tetraspanine de surface cellulaire qui organise des microdomaines membranaires et régule le regroupement des récepteurs, l’adhérence et la transduction du signal dans les cellules immunitaires et non immunitaires. CD81 participe à la fonction de co-récepteur des lymphocytes B avec CD19/CD21, module le trafic dépendant des intégrines et influence des voies qui contrôlent la présentation de l’antigène, l’activation cellulaire et la biogenèse des vésicules/exosomes. Une expression ou une compartimentation dérégulée de CD81 a été associée à des altérations de la signalisation immunitaire et du comportement des cellules tumorales, ce qui soutient son utilisation comme marqueur et nœud mécanistique en recherche en immunologie et en oncologie. CD81 est largement utilisé dans les études des complexes de protéines membranaires, la caractérisation des vésicules extracellulaires et les interactions pathogène–hôte, où les réseaux de tetraspanines gouvernent l’entrée et la propagation de cellule à cellule.

CD81 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD81 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD81 Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD81 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD81, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD81. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD81 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD81 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD81 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD81 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.