Plásmido Doble Nickase (h) CD8-β: sc-400950-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD8-β consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD8-β (h) y el plásmido de doble nickasa CD8-β (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD8B. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD8-β Anticuerpo (F-5): sc-25277
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD8-β | sc-400950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD8-β | sc-400950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD8B codifica la cadena CD8-β, una glucoproteína transmembrana que se asocia con CD8-α para formar el correceptor CD8 en los linfocitos T citotóxicos. Al unirse a moléculas del MHC de clase I, CD8 aumenta la sensibilidad del TCR y recluta la quinasa LCK de la familia Src para amplificar las cascadas de señalización posteriores que determinan la activación, la diferenciación efectora y la formación de la sinapsis inmunológica. La expresión de CD8B y la composición del correceptor CD8 influyen en las respuestas citotóxicas específicas de antígeno, en los programas de agotamiento de las células T y en la dinámica de la vigilancia inmunitaria. La alteración de la función del linaje CD8 es relevante en estudios de infección viral crónica, inmunología tumoral y desregulación inmunitaria, donde los umbrales de señalización de CD8 afectan al fenotipo y a la función.
CD8-β El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD8B en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD8B. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD8B. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD8B alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.