Plasmide Double Nickase (h) CD8-β: sc-400950-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD8-β correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD8-β Double Nickase (h) et le plasmide CD8-β Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD8B. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD8-β Antibody (F-5): sc-25277
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD8-β | sc-400950-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD8-β | sc-400950-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD8B code la chaîne CD8-β, une glycoprotéine transmembranaire qui s’associe à CD8-α pour former le co-récepteur CD8 à la surface des lymphocytes T cytotoxiques. En se liant aux molécules du CMH de classe I, CD8 augmente la sensibilité du TCR et recrute la kinase LCK de la famille Src afin d’amplifier les cascades de signalisation en aval qui orientent l’activation, la différenciation effectrice et la formation de la synapse immunologique. L’expression de CD8B et la composition du co-récepteur CD8 influencent les réponses cytotoxiques spécifiques de l’antigène, les programmes d’épuisement des lymphocytes T et la dynamique de la surveillance immunitaire. Une altération de la fonction de la lignée CD8 est pertinente pour l’étude des infections virales chroniques, de l’immunologie des tumeurs et de la dysrégulation immunitaire, où les seuils de signalisation de CD8 conditionnent le phénotype et la fonction.
CD8-β Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD8B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD8B. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD8B. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD8B.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.