CD8-β Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419577

Descripción general

Cd8b1 codifica CD8-β, una glicoproteína transmembrana de tipo I que se asocia con CD8-α para formar el correceptor CD8 en los linfocitos T citotóxicos y en un subconjunto de células dendríticas. Al unirse al MHC de clase I y reclutar la quinasa LCK de la familia Src, CD8-β ayuda a ajustar la intensidad de la señalización del receptor de células T, la formación de la sinapsis inmunológica y las cascadas de fosforilación posteriores que regulan la activación, la proliferación y la diferenciación efectora. La expresión de CD8-β influye en la selección tímica y en el mantenimiento periférico de las células T CD8+, afectando la inmunidad y la tolerancia específicas de antígeno. La alteración de la función del correceptor CD8 es relevante para la disrregulación inmunitaria y para modelos de infección, inflamación e inmunología tumoral en los que las respuestas de las células T CD8+ determinan los fenotipos de la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO CD8-β (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Cd8b1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Cd8b1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Cd8b1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína CD8-β.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Cd8b1 para la investigación de la señalización de CD8-β, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Cd8b1 críticos para la función de CD8-β
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Cd8b1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido CD8-β CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido CD8-β CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Cd8b1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR CD8-β (m) y el plásmido HDR CD8-β (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Cd8b1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Cd8b1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.