Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-β (h): sc-400950

Présentation

CD8B code pour CD8-β, une glycoprotéine transmembranaire de type I qui s’hétérodimérise avec CD8-α pour former le corécepteur CD8 sur les lymphocytes T cytotoxiques et sur certains sous-ensembles de thymocytes. En se liant au CMH de classe I et en s’associant à LCK, CD8-β renforce l’intensité de la signalisation du TCR, favorisant l’activation spécifique de l’antigène, la formation de la synapse immunologique et les voies en aval contrôlant la prolifération, la production de cytokines et la différenciation des effecteurs cytolytiques. L’expression de CD8B contribue à la sélection thymique et au maintien de l’identité des lymphocytes T CD8+, influençant la surveillance immunitaire et les réponses aux infections. Une signalisation dérégulée du corécepteur CD8 et des profils d’expression altérés de CD8B sont pertinents dans les études sur l’auto-immunité, l’inflammation chronique, l’immunologie des tumeurs et les phénotypes d’épuisement des lymphocytes T.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-β (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CD8B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CD8B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CD8B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD8-β.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CD8B pour l'étude de la signalisation de CD8-β, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CD8B essentiels à la fonction de CD8-β
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CD8B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD8-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le CD8-β plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CD8B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD8-β plasmide HDR (h) et le CD8-β (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CD8B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CD8B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.