Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD8-β: sc-400950-ACT

CD8B code la chaîne CD8-β, une glycoprotéine transmembranaire de type I qui s’associe à CD8-α pour former le corécepteur CD8 sur les lymphocytes T cytotoxiques et sur une sous-population de cellules NK. En se liant au CMH de classe I et en s’associant à la kinase LCK de la famille Src, CD8 renforce la transduction du signal du récepteur des lymphocytes T (TCR), favorise la formation de la synapse immunologique et contribue à la sélection thymique ainsi qu’à la différenciation effectrice. L’expression de CD8B et la fonction du corécepteur CD8 sont étroitement liées aux réponses cytotoxiques spécifiques de l’antigène, à la surveillance immunitaire et aux dynamiques d’épuisement des lymphocytes T dans les infections chroniques et les microenvironnements tumoraux. Une signalisation dérégulée associée à CD8 et des états altérés des lymphocytes T CD8+ sont fréquemment étudiés en immunologie des cancers, en auto-immunité et dans la recherche sur les immunodéficiences primaires.

CD8-β Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD8B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD8-β Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD8B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD8B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD8-β. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD8B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD8-β au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD8-β dans les cellules tumorales présentant une expression de CD8B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.