Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-α (m): sc-419576

Présentation

Cd8a code CD8-α, une glycoprotéine transmembranaire qui forme des homodimères CD8αα ou des hétérodimères CD8αβ et qui sert de corécepteur à la reconnaissance des lymphocytes T restreinte au CMH de classe I. En s’associant à LCK et au complexe TCR/CD3, CD8-α amplifie la signalisation dépendante de l’antigène, la formation de la synapse immunologique et les programmes d’activation en aval qui contrôlent la différenciation cytotoxique, la production de cytokines et les réponses des cellules mémoire effectrices. CD8-α contribue également à la sélection thymique et à l’homéostasie périphérique des lymphocytes T CD8+, le reliant ainsi à des voies qui régissent le développement des lymphocytes T et la surveillance immunitaire. Une altération des fonctions dépendantes de CD8-α est pertinente dans des modèles d’infection, d’immunologie tumorale et d’inflammation auto-immune, où des modifications de la fréquence des lymphocytes T CD8+ ou de l’intensité de leur signalisation peuvent remodeler la pathologie tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD8-α (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd8a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd8a, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd8a à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD8-α.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd8a pour l'étude de la signalisation de CD8-α, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd8a essentiels à la fonction de CD8-α
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd8a pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD8-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD8-α plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd8a. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD8-α plasmide HDR (m) et le CD8-α (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd8a pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd8a définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.