Plasmide Double Nickase (m) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-423504-NIC

Le gène murin **Tfrc** code **CD71/TFRC**, un récepteur transmembranaire de type II qui se lie à la transferrine et assure l’endocytose dépendante de la clathrine du ligand chargé en fer, afin de permettre l’acheminement du fer à l’intérieur de la cellule. En régulant l’absorption cellulaire du fer et les voies de signalisation sensibles au fer, **TFRC** influence la synthèse de l’hème, la respiration mitochondriale, la réplication de l’ADN et l’homéostasie du stress oxydant, et son expression est étroitement liée à l’état prolifératif. **CD71** est fortement exprimé dans les cellules à division rapide et dans les lignées immunitaires où les besoins en fer sont élevés, reliant la biologie de **TFRC** à l’activation des lymphocytes, à l’érythropoïèse et à la reprogrammation métabolique. Une gestion dysrégulée du fer et une expression altérée de **TFRC** sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que l’anémie, l’inflammation, la neurodégénérescence et le métabolisme du fer associé aux tumeurs.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tfrc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tfrc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tfrc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tfrc.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.