Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD71/TFRC/Transferrin Receptor: sc-400310-ACT

TFRC code pour CD71, le récepteur de la transferrine qui assure la liaison à haute affinité et l’endocytose dépendante de la clathrine de la transferrine afin de délivrer le fer aux cellules, soutenant la synthèse de l’hème, la respiration mitochondriale et la réplication de l’ADN. Après l’acidification endosomale et la libération du fer, l’apo‑transferrine et CD71 sont recyclés vers la membrane plasmique, couplant l’entrée du fer au trafic membranaire et aux voies lysosomales/endosomales. L’expression de TFRC est étroitement régulée par des éléments de réponse au fer et s’intègre à la signalisation IRP/IRE, aux programmes de prolifération pilotés par MYC et aux réseaux sensibles à l’hypoxie qui ajustent la demande cellulaire en fer. La dérégulation de l’activité de TFRC et de la gestion du fer est fréquemment étudiée dans le métabolisme du cancer, l’activation des cellules immunitaires, la biologie liée à l’anémie et les interactions hôte–pathogène dépendantes de la disponibilité en fer.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TFRC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD71/TFRC/Transferrin Receptor Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TFRC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TFRC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD71/TFRC/Transferrin Receptor. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TFRC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD71/TFRC/Transferrin Receptor au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD71/TFRC/Transferrin Receptor dans les cellules tumorales présentant une expression de TFRC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.