Plasmide CRISPR/Cas9 KO CD68 (m): sc-419565

Présentation

Cd68 code pour CD68, une protéine membranaire lysosomale/endosomale fortement glycosylée, enrichie dans les monocytes, les macrophages tissulaires, la microglie, les cellules dendritiques et les ostéoclastes. Elle est couramment utilisée comme marqueur de la lignée des phagocytes et est associée à l’endocytose, à la maturation des phagolysosomes, au traitement des antigènes et aux programmes d’activation de l’immunité innée qui façonnent la signalisation inflammatoire. Les populations myéloïdes CD68-positives influencent le remodelage tissulaire, la gestion des lipides et les réseaux de cytokines au sein du microenvironnement tumoral et dans les contextes d’inflammation chronique. Des altérations de l’expression de Cd68 et l’accumulation de cellules CD68+ sont fréquemment étudiées dans la neuroinflammation, l’athérosclérose, la fibrose et des modèles de maladies auto-immunes comme indicateurs de l’activation et de l’infiltration des macrophages/microglies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO CD68 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd68 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd68, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd68 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine CD68.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd68 pour l'étude de la signalisation de CD68, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd68 essentiels à la fonction de CD68
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd68 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le CD68 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le CD68 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd68. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le CD68 plasmide HDR (m) et le CD68 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd68 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd68 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.