Plasmide CRISPR d'Activation (m) CD64: sc-420305-ACT

Le gène murin **Fcgr1** code **CD64 (FcγRI)**, un récepteur de **haute affinité** pour les IgG, exprimé principalement par les **monocytes**, les **macrophages** et les **cellules dendritiques**. Dans ces cellules, il couple la reconnaissance des complexes immuns à la **phagocytose**, à l’**explosion oxydative** et à la **production de cytokines**. CD64 transmet le signal via le motif **ITAM** de la **chaîne γ des FcR**, activant les voies **SYK**, **PI3K**, **MAPK** et **NF-κB**, ce qui intègre l’activation de l’immunité innée avec la capture et le traitement de l’antigène. En tant que régulateur des fonctions effectrices dépendantes des anticorps, **Fcgr1** est largement étudié dans des contextes inflammatoires et auto-immuns, dans des modèles d’infection et dans la biologie des cellules myéloïdes associées aux tumeurs, où des variations d’expression de CD64 peuvent refléter des états d’activation modifiés et la différenciation myéloïde. Son rôle dans la prise en charge des complexes immuns relie également **Fcgr1** au dialogue avec le **complément**, à l’**endocytose médiée par les Fc** et à des programmes transcriptionnels en aval qui façonnent l’inflammation tissulaire.

CD64 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Fcgr1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD64 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Fcgr1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Fcgr1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD64. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Fcgr1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD64 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD64 dans les cellules tumorales présentant une expression de Fcgr1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.