Plásmido CRISPR de Activación (m) CD64: sc-420305-ACT

El gen murino **Fcgr1** codifica **CD64 (FcγRI)**, un receptor de alta afinidad para **IgG** que se expresa predominantemente en **monocitos, macrófagos y células dendríticas**, donde conecta el reconocimiento de complejos inmunes con la **fagocitosis**, el **estallido oxidativo** y la **producción de citocinas**. CD64 señaliza a través del motivo **ITAM** de la **cadena γ del FcR** para activar las vías de **SYK, PI3K, MAPK y NF-κB**, integrando la activación de la inmunidad innata con la captación y el procesamiento de antígenos. Como regulador de funciones efectoras dependientes de anticuerpos, **Fcgr1** se estudia ampliamente en contextos inflamatorios y autoinmunes, en modelos de infección y en la biología mieloide asociada a tumores, donde los cambios en la expresión de CD64 pueden reflejar estados de activación alterados y la diferenciación mieloide. Su papel en el manejo de complejos inmunes también vincula a **Fcgr1** con la interacción con el complemento, la endocitosis mediada por Fc y programas transcripcionales posteriores que moldean la inflamación tisular.

CD64 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Fcgr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD64 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Fcgr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Fcgr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD64. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Fcgr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD64 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD64 en células tumorales con expresión de Fcgr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.