Plásmido Doble Nickase (h) CD63: sc-400061-NIC

CD63 (tetraspanina-30) es una tetraspanina de amplia expresión, enriquecida en endosomas tardíos, lisosomas y exosomas, donde ayuda a organizar microdominios enriquecidos en tetraspaninas que coordinan el tráfico y la señalización de proteínas de membrana. Al asociarse con integrinas y receptores inmunitarios, CD63 regula la maduración endosomal, el acoplamiento y la fusión de vesículas, el procesamiento de antígenos y vías relacionadas con la adhesión celular. CD63 se utiliza habitualmente como marcador de vesículas extracelulares y participa en procesos como la modulación inmunitaria, la entrada/salida viral y la regulación de la actividad de proteasas en gránulos secretores. La expresión o localización alteradas de CD63 se han asociado con respuestas inflamatorias y con fenotipos de invasión/metástasis en células cancerosas, lo que impulsa estudios mecanísticos sobre su papel en la dinámica de membranas y la comunicación intercelular.

CD63 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD63 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD63. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD63. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD63 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.