CD6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403748-ACT

CD6 é uma glicoproteína de superfície das células T da família dos recetores “scavenger” ricos em cisteína (SRCR) que modula a sinalização do recetor de antigénio na sinapse imunológica. Por meio de interações com ligandos como a ALCAM (CD166), o CD6 contribui para os limiares de ativação das células T, para a sinalização dependente de adesão e para vias a jusante, incluindo MAPK e NF-κB, que moldam a produção de citocinas e a diferenciação efectora. Alterações na expressão ou na sinalização de CD6 têm sido associadas a respostas imunitárias desreguladas e a patologia inflamatória, tornando-o um nó útil para estudar a homeostase imunitária e a comunicação entre leucócitos. Em sistemas humanos, o CD6 oferece um ponto de apoio prático para dissecar a dinâmica de contacto célula T–APC, a integração de coestimulação e perturbações de redes imunitárias relevantes para a autoimunidade e para modelos de doenças mediadas pelo sistema imunitário.

CD6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de CD6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

CD6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus CD6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição CD6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de CD6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus CD6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de CD6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via CD6 em células tumorais com expressão de CD6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.