Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD6: sc-403748-ACT

CD6 est une glycoprotéine de surface des lymphocytes T appartenant à la famille des récepteurs « scavenger » riches en cystéines (SRCR), qui module la signalisation du récepteur de l’antigène au niveau de la synapse immunologique. Par ses interactions avec des ligands tels qu’ALCAM (CD166), CD6 contribue aux seuils d’activation des lymphocytes T, à la signalisation dépendante de l’adhésion et à des voies en aval, notamment MAPK et NF-κB, qui façonnent la production de cytokines et la différenciation des cellules effectrices. Une expression ou une signalisation altérée de CD6 a été associée à des réponses immunitaires dérégulées et à des pathologies inflammatoires, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier l’homéostasie immunitaire et la communication entre leucocytes. Dans les systèmes humains, CD6 offre un levier expérimental pratique pour disséquer la dynamique des contacts lymphocyte T–CPA, l’intégration des signaux co-stimulateurs et les perturbations des réseaux immunitaires pertinentes pour l’auto-immunité et les modèles de maladies à médiation immunitaire.

CD6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD6 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.