Plásmido CRISPR de Activación (h) CD5L: sc-404865-ACT

CD5L (molécula similar a CD5) es una proteína secretada rica en cisteína con función de receptor “scavenger”, producida predominantemente por macrófagos, que modula la homeostasis inmunitaria innata y la inflamación. Se une a diversos ligandos lipídicos y microbianos e influye en procesos como la polarización de los macrófagos, el procesamiento de células apoptóticas y el metabolismo lipídico, integrándose en vías relacionadas con la señalización de citocinas y la remodelación tisular. CD5L se ha asociado con patología mediada por el sistema inmunitario e inflamación metabólica, y se han descrito alteraciones en su expresión en contextos como lesiones ateroscleróticas, estados inflamatorios crónicos y la biología de macrófagos asociados a tumores. Estas características hacen de CD5L una diana útil para analizar señales microambientales impulsadas por macrófagos y el diálogo cruzado lípido-inmunitario en modelos celulares humanos.

CD5L El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CD5L sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

CD5L El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CD5L en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CD5L, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de CD5L. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CD5L y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de CD5L en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía CD5L en células tumorales con expresión de CD5L silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.