Particules Lentivirales d'Activation (h2) CD45: sc-400245-LAC-2

Le gène humain PTPRC code CD45, une phosphatase à tyrosine de type récepteur exprimée sur la plupart des cellules hématopoïétiques, qui ajuste les seuils de signalisation en déphosphorylant des substrats clés au sein des cascades des récepteurs immunitaires. CD45 constitue un régulateur central de la signalisation du récepteur des cellules T (TCR) et du récepteur des cellules B (BCR) via la modulation des kinases de la famille Src (p. ex., LCK, FYN), influençant ainsi l’activation et la différenciation des lymphocytes, ainsi que les réponses cytokiniques. Des altérations de l’expression de CD45 ou de l’utilisation de ses isoformes sont liées à une dysrégulation immunitaire et ont été associées à des phénotypes auto-immuns et à la biologie des hémopathies malignes, ce qui en fait un marqueur largement utilisé pour le profilage des leucocytes. Les outils de recherche dédiés à PTPRC/CD45 soutiennent les études de la transduction du signal, du contrôle par rétroaction dépendant des phosphatases et de la génomique fonctionnelle dans des cellules immunitaires primaires et des systèmes modèles modifiés.

Les particules d'activation lentivirales CD45 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PTPRC dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD45 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PTPRC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD45. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PTPRC ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.