Plasmide Double Nickase (m) CD44: sc-419558-NIC

Cd44 code pour CD44, une glycoprotéine transmembranaire qui agit comme principal récepteur de l’hyaluronane et d’autres ligands de la matrice extracellulaire, en coordonnant l’adhérence cellule–cellule et cellule–matrice. Dans les cellules murines, CD44 contribue au remodelage du cytosquelette, à la migration et à la prolifération via des voies faisant intervenir les protéines ERM, les GTPases de la famille Rho et la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance, ce qui façonne l’organisation tissulaire et les réponses inflammatoires. Le choix des isoformes de CD44 et l’état de glycosylation influencent le regroupement des récepteurs et la signalisation en aval, affectant le trafic des leucocytes et les interactions avec le stroma. Une activité de CD44 dérégulée est fréquemment étudiée dans des contextes d’inflammation chronique, de fibrose et de motilité cellulaire associée aux tumeurs, ce qui en fait une cible courante pour des études mécanistiques des phénotypes pilotés par le microenvironnement.

CD44 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Cd44 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Cd44. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Cd44. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Cd44.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.