Plasmide Double Nickase (h) CD44: sc-400209-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) CD44 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide CD44 Double Nickase (h) et le plasmide CD44 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant CD44. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: CD44 Antibody (DF1485): sc-7297
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) CD44 | sc-400209-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) CD44 | sc-400209-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD44 code une glycoprotéine de surface cellulaire qui agit comme récepteur principal de l’hyaluronane et de ligands apparentés de la matrice extracellulaire, coordonnant l’adhésion cellule–cellule et cellule–matrice. Par ses interactions avec les protéines ERM et la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase, CD44 contribue au remodelage du cytosquelette, à la migration et à des voies de survie, notamment la signalisation des GTPases Rho ainsi que les cascades PI3K–AKT et MAPK/ERK. L’épissage alternatif et une glycosylation dynamique génèrent des isoformes de CD44 qui influencent la plasticité épithélio‑mésenchymateuse, le trafic des cellules inflammatoires et le remodelage tissulaire. Une expression dérégulée de CD44 et l’utilisation anormale de ses isoformes sont fréquemment étudiées dans l’invasion et les métastases cancéreuses, les phénotypes de type « cellules souches » et les maladies inflammatoires chroniques.
CD44 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus CD44 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de CD44. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de CD44. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de CD44.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.