Plasmide CRISPR d'Activation (h) CD44: sc-400209-ACT

Le CD44 humain code une glycoprotéine multifonctionnelle de surface cellulaire qui se lie à l’hyaluronane et à d’autres ligands de la matrice extracellulaire afin de réguler l’adhérence cellulaire, la migration et le homing (adressage) des lymphocytes. CD44 participe au remodelage du cytosquelette et à la transduction du signal via des voies impliquant les protéines ERM, les GTPases de la famille Rho et le dialogue fonctionnel avec les récepteurs à activité tyrosine kinase, modulant ainsi les réponses aux signaux inflammatoires et aux microenvironnements tissulaires. L’épissage alternatif et les modifications post‑traductionnelles diversifient les isoformes de CD44 et ajustent la liaison aux ligands ainsi que les sorties de signalisation. Une expression dérégulée de CD44 et l’utilisation anormale de ses isoformes sont fréquemment étudiées dans des contextes tels que l’invasion tumorale et les métastases, la transition épithélio‑mésenchymateuse, la fibrose et le trafic des cellules immunitaires.

CD44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de CD44 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

CD44 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus CD44 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription CD44, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de CD44. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus CD44 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de CD44 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie CD44 dans les cellules tumorales présentant une expression de CD44 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.