Particules Lentivirales d'Activation (m) CD40: sc-423444-LAC

Le gène murin *Cd40* code CD40, un membre de la superfamille des récepteurs du TNF fortement exprimé sur les cellules présentatrices d’antigène, où il coordonne l’activation immunitaire via les interactions CD40–CD40L. La signalisation de CD40 recrute des adaptateurs TRAF pour activer des programmes dépendants de NF-κB, des MAPK et de PI3K, qui régulent la maturation des cellules dendritiques, la prolifération des lymphocytes B, les réactions des centres germinatifs, la commutation de classe (recombinaison de commutation isotypique) et la production de cytokines. Par ces voies, CD40 façonne l’amorçage des lymphocytes T et l’immunité humorale, et contribue à des circuits inflammatoires pertinents pour l’auto-immunité, l’inflammation chronique et la modulation immunitaire associée aux tumeurs. La perturbation de l’expression de *Cd40* est donc largement étudiée dans des modèles de dérégulation immunitaire, de biologie lymphoïde et de réponses hôte–pathogène.

Les particules d'activation lentivirales CD40 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Cd40 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales CD40 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Cd40, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de CD40. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Cd40 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.