Plásmido Doble Nickase (h) CD4: sc-400237-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)CD4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa CD4 (h) y el plásmido de doble nickasa CD4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a CD4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: CD4 Anticuerpo (MT310): sc-19641
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) CD4 | sc-400237-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) CD4 | sc-400237-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CD4 codifica una glicoproteína transmembrana de tipo I expresada predominantemente en los linfocitos T colaboradores, donde actúa como correceptor en el reconocimiento de antígenos restringido por el MHC de clase II y potencia la señalización del TCR mediante su asociación con la cinasa LCK de la familia Src. Al organizar la formación de la sinapsis inmunológica y modular las cascadas de fosforilación aguas abajo, CD4 influye en la activación, la diferenciación y los programas de citocinas de las células T que dan forma a las respuestas inmunitarias adaptativas. Las alteraciones en la expresión o la señalización de CD4 son relevantes para la desregulación inmunitaria y la patología inflamatoria, y la biología de las células T CD4 positivas es central en estudios de inmunodeficiencia e interacciones huésped–patógeno. Como marcador de superficie y nodo de señalización, CD4 se analiza con frecuencia en vías que regulan el desarrollo de los linfocitos, la polarización efectora y la comunicación entre células inmunitarias.
CD4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CD4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CD4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CD4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CD4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.